三大细节拿捏好，人iPS-肝分化成功率up up up！

肝脏的重要性不言而喻，在肝脏内进行的生化反应有500多种，一旦肝功能紊乱，会导致一系列代谢疾病的发生。无论是从事肝脏疾病机理研究还是肝脏相关药物代谢研究，具有预测功能的肝细胞模型都是必要的工具。

人ipS细胞分化的肝细胞与原代肝细胞功能相似，并保留供体的遗传背景，是一种新型的肝细胞模型。其最大的亮点是由于ipS细胞可稳健增殖，只要通过持续分化即可供应相同遗传背景的肝细胞，规避了人原代肝细胞供体材料有限、无法持续供应的缺点。

Takara Cellartis ipS Cell to Hepatocyte Differentiation System（Y30055）是一款完整、高效、新手友好型的分化系统，可在三周内生成具备功能特性的人ipS来源肝细胞。

来，上视频！6分钟，快速了解Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）！

细节的实质是认真的态度和科学的精神，奥秘全在细节处。Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）的使用说明书就有满满29页，可以说是非常之详细了！贴心小编已经自觉化身课代表为大家划好了重点，以下三大细节拿捏好，高效使用Takara肝分化系统，成功率up up up！

一、细胞计数

使用合适的接种密度是成功ipS-肝分化的关键，请务必要正确计数细胞。我们建议使用血球计数板。如果使用自动化细胞计数仪，需要同时在血球计数板中加入相同的细胞悬液来校验自动计数的结果，从而对应调整好自动计数仪的设置。

ipS-DE细胞分化阶段，起始ipS细胞太稀疏将导致分化Day 4前大量细胞死亡；过密会导致分化过程中同质性降低；推荐接种密度4.0x104 cells/cm2。

DE-肝细胞分化阶段，起始DE细胞太稀疏将导致获得的肝细胞生存培养周期缩短和性能不佳，因为肝细胞生存和功能维持需要细胞间的接触；如果过密，过剩的细胞将不会贴壁，在换液时会被移除；推荐接种密度1.2x105 cells/cm2。

二、换液时间

ipS-DE细胞分化阶段，每天大约在同一时间换液，尽量在上午10点至下午4点，确保持续为细胞提供新鲜的营养物质和生长因子。DE-肝细胞分化阶段，换液时间要求不那么苛刻，适当延后10-12小时也可以。

三、覆盖层(Overlay)

DE-肝细胞分化阶段，非常重要的是覆盖层(Overlay)的制备、形成和后续换液。

Day 14和Day 16换液时，需要确保Maturation Medium温度在16℃ - 18℃。如果温度过高，覆盖层在接触细胞前就会胶化和脱落，一个完整的覆盖层就不会形成；温度过低，细胞可能会收缩但是仍会恢复。

更换Maturation Medium 48h内，不要再移动触碰细胞。这就意味着Day 15和Day 17不要观察细胞。因为如果移动细胞，很有可能形成分布不均匀的覆盖层，这会显著影响后续的分化。

Day 18及后续天数换液时，不要破坏覆盖层。我们建议倾斜培养板，使用手动移液器（单孔、多孔）小心移除90%旧的培养基，沿着侧壁小心添加新的培养基，参考以下示意图。

如有问题，欢迎联络咨询探讨（李女士，010-80720986，[email protected]）！

附《Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）资料合集》，拿走拿走别客气！

1.操作说明：Cellartis ipS Cell to Hepatocyte Differentiation System User Manual
2.技术资料：A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various ipS cell sources
3.技术资料：Next-generation human ipS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling
4.技术资料：Next-generation human ipS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies
5.应用文献：Cellartis ipS Cell to Hepatocyte Differentiation System citation list

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